作者：徐秀莲; 戚金亮; 陈声利; 姜袆群; 曾学思...端粒末端转移酶rna干扰淋巴瘤t细胞皮肤细胞端粒酶活性sirnahtr基因htert高效合成hut78细胞株聚丙烯酰胺凝胶电泳
摘要：目的探讨合成端粒酶逆转录酶(hTERT)基因及端粒酶RNA(hTR)的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)细胞株Hut78端粒酶活性的影响.方法采用体外转录法分别合成两条hTERT-siRNA及hTR-siRNA.采用siRNA直接处理细胞裂解液及磷酸钙共沉淀法将siRNA转染入Hut78细胞两种处理方式,应用端粒酶重复序列扩增聚合酶链反应(TRAP-PCR)及聚丙烯酰胺凝胶电泳银染检测端粒酶活性的变化.结果体外转录法能高效合成siRNA,产量达22.4μg/40 μL siRNA合成体系.经250 ng siRNA直接处理细胞裂解液后,可高效降低端粒酶的活性,抑制率达87%左右.30 ng siRNA转染细胞36 h后,可降低端粒酶活性20%左右,而250 ng siRNA可降低75%左右.结论体外转录法能高效、快速、大量合成siRNA,针对hTERT及hTR基因的siRNA可明显降低Hut78细胞株的端粒酶活性.
注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社
