作者：王飞; 毕志刚; 李光富; 吴海玮; 王群; 刘...人乳头瘤病毒11型基因重组腺病毒载体hacat细胞激光共聚焦显微镜hpv11e7蛋白基因真核细胞表达e7基因重组质粒pcr法定向克隆paci脂质体法表达情况分析鉴定蛋白表达a细胞转染cmvpad人胚肾重组子细胞内
摘要：目的构建人乳头瘤病毒11型(HPV11)E7蛋白基因腺病毒载体,并在真核细胞表达.方法用PCR法,扩增出HPV11E7基因,定向克隆至pENTR-TOPO载体形成重组质粒TOPO-E7.TOPO-E7与腺病毒载体pAD/CMV/V5-DESTTM重组反应,E7基因被重组到腺病毒载体上.该载体经PacI酶切,脂质体法转染人胚肾293A细胞,获得重组腺病毒载体pAD-E7.pAD-E7转染人HaCaT细胞,激光共聚焦显微镜分析E7蛋白表达情况.结果经酶切及序列分析鉴定,重组质粒TOPO-E7成功构建.重组子一D-E7转染293A细胞后,获得滴度为1.4×107 pfu/mL的重组腺病毒载体.该载体转染HaCaT细胞,48 h后激光共聚焦显微镜下可见细胞内E7蛋白表达.结论重组腺病毒载体能有效介导HPV11E7基因在真核细胞的表达.
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