作者：窦献蕊; 余学清; 李晓艳; 陈文芳; 郝文科...信号蛋白大鼠腹膜纤维化动物模型腹膜组织基因表达腹膜透析
摘要：目的了解TGF-β1/Smads信号蛋白在高浓度葡萄糖透析液及炎症所致大鼠腹膜纤维化模型腹膜组织中的表达及在腹膜纤维化发生中的可能作用.方法 24只SD雄性大鼠(180～200 g)随机分为4组,每组6只.正常对照组,大鼠不做任何处理; LPS组,LPS用生理盐水稀释为0.6 mg/100 ml,在第1、3、5、7日按0.6 mg/kg体重腹腔注射; 4.25%透析液组,大鼠给予每日腹腔注射100 ml/kg 体重高糖透析液; LPS +4.25%透析液组,除每日腹腔注射100 ml/kg 体重高糖透析液外,LPS用4.25%透析液稀释为0.6 mg/100 ml,在第1、3、5、7日按0.6 mg/kg体重腹腔注射;于实验第28天杀检动物,取壁层和脏层腹膜组织行光镜及电镜检查.用RT-PCR及间接免疫荧光、Western杂交的方法检测α-SMA、TGF-β1、Smad3、Smad7、p-Smad2/3、 ColⅠ mRNA和蛋白的表达水平.结果Masson染色显示,与正常对照组比较,4 W时各组壁层腹膜组织明显增厚,有大量胶原沉积,其中LPS+4.25%透析液组厚度最为显著(vs LPS组:42 μm±3 μm vs 35 μm±4 μm,P=0.007,vs 4.25%透析液组,42 μm±3 μm vs 20 μm±4 μm,P=0.000 );与正常对照组比较,三组α-SMA、ColⅠ和TGF-β1、Smad3、p-Smad2/3在脏层腹膜组织中的表达水平显著上调,上述变化以LPS+4.25%透析液组改变最为显著,TGF-β1 mRNA为正常对照组的2倍,Smad3 mRNA为正常对照组的1.8倍;与正常对照组比较,抑制性信号蛋白Smad7 mRNA和蛋白表达水平在其他三组也有不同程度的上调,但Western杂交结果显示,p-Smad/ Smad7蛋白比值仍明显升高;电镜结果显示,除正常对照组外,各组间皮细胞均有损伤, LPS +4.25%透析液组的间皮细胞损伤最为明显,而且胞浆中出现明显的肌丝和密体.结论TGF-β1/Smads信号蛋白的活化是高浓度葡萄糖透析液和LPS导致大鼠腹膜发生纤维化的共同作用途径.高浓度葡萄糖透析液和LPS可能协同作用通过TGF-β1/Smads通路刺激腹膜间皮细胞转分化,介导腹膜纤维化的发生.
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