作者：卢蓉; 葛坚; 黄冰; 黄丹平; 高楠; 魏雁涛...皮肤干细胞可塑性结膜上皮细胞皮肤干细胞恒河猴干细胞分化体外诱导绿色荧光蛋白基因
摘要：目的诱导体外培养、纯化的恒河猴皮肤干细胞向结膜上皮细胞分化,探索皮肤干细胞的可塑性.方法体外培养恒河猴皮肤干细胞,用Ⅳ型胶原纯化,纯化前后用流式细胞仪检测β1整合素和角蛋白15阳性细胞比例,纯化后的皮肤干细胞用细胞免疫荧光和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术鉴定β1整合素和角蛋白15.皮肤干细胞转染绿色荧光蛋白基因,24 h后挑选出有荧光的细胞,与人结膜上皮细胞共培养10 d,再进行结膜上皮细胞的特异性抗原黏蛋白4和角蛋白4的鉴定,检测方法包括细胞免疫荧光和RT-PCR.结果体外培养的皮肤干细胞纯化后比例接近90%.细胞免疫荧光和RT-PCR检测β1整合素和角蛋白15阳性.转染绿色荧光蛋白基因24 h后,细胞呈现绿色荧光,与结膜上皮细胞共培养10 d后,细胞免疫荧光和RT-PCR检查黏蛋白4和角蛋白4阳性.结论在体外培养纯化的灵长类动物恒河猴皮肤干细胞,在适宜条件下,可诱导分化为有结膜上皮细胞特征的细胞.
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