作者：李磊; 贺大林; 何辉; 王新阳; 张林琳; 罗...肿瘤细胞凋亡生长抑制因子western印迹法膀胱半胱氨蛋白水解酶survivin凋亡相关蛋白pml蛋白表达激光共聚焦真核表达载体诱导表达肿瘤细胞系分子机制方法应用抗性克隆稳定表达表达情况细胞核内
摘要：目的探讨生长抑制因子(PML)诱导膀胱肿瘤细胞凋亡的分子机制.方法应用脂质体Lipofectamine2000分别将重组可诱导表达的真核表达载体PMEP4/PML和对照PMEP4空载体转染到膀胱肿瘤细胞系UM-UC-2中,300 μg/ml 潮霉素B筛选稳定表达PML的抗性克隆.激光共聚焦检测PML蛋白表达.DNA ladder法检测肿瘤细胞凋亡.Western印迹法检测凋亡相关蛋白表达情况.结果经5 μmol/L的CdSO4诱导表达后,激光共聚焦显微镜观察发现转染PMEP4/PML组的细胞核内有散在的斑点样的黄绿色荧光亮点,而转染空载体PMEP4组细胞未见特异性的荧光斑点表达.DNA梯度法显示转染PML细胞在诱导PML表达后24 h出现梯状凋亡条带.Western印迹法检测凋亡相关蛋白半胱氨蛋白水解酶3、活化PARP上调,而survivin的表达水平下调.结论 PML诱导膀胱肿瘤细胞凋亡可能与上调半胱氨蛋白水解酶3、活化PARP蛋白,抑制survivin的表达有关.
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