作者：王莎; 柴玉波; 刘飞; 张孝勇; 贾卫; 谢鑫...k562细胞表达特异性blot法慢性粒细胞白血病rna干涉小干涉rnarna分子
摘要：目的应用特异性siRNA(小干涉RNA)抑制慢性粒细胞白血病bcr-abl融合基因表达,观察其对K562细胞生物学特性的影响.方法以慢性粒细胞白血病细胞系K562为研究对象,合成并转染针对K562细胞bcr-abl融合基因融合位点的21nt siRNA,应用Western blot法检测bcr-abl融合基因的表达;3H-TdR掺入法检测K562细胞的增殖活性;Annexin Ⅴ-FITC/PI染色法检测K562细胞的存活状况;流式细胞仪法检测K562细胞周期变化以及联苯胺染色法检测K562细胞的分化状况;应用Western blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-xL/Bax的表达.结果 (1)RNA干涉组K562细胞bcr-abl融合基因的表达水平明显下降;(2)RNA干涉组的CPM值(每分钟脉冲数)在siRNA转染K562细胞第24 h, 48 h, 72 h和96 h均明显低于对照组(下降率依次为33.06%,52.25%,57.64%,70.87%),(3)RNA干涉组转染48h时有43.2%的K562细胞发生凋亡;(4)RNA干涉组K562细胞凋亡相关蛋白Bcl-xL的表达水平下调,但Bax的表达无明显变化;(5)RNA干涉组K562细胞联苯胺染色阳性比例增加,部分K562细胞向红系分化;(6)RNA干涉组K562细胞出现明显的G1期阻滞.结论特异性siRNA分子可以显著抑制bcr-abl融合基因的表达,影响K562细胞的基本生物学特性,最终导致K562细胞分化或凋亡.
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