作者：李娅杰; 彭劲民; 张奉春单克隆抗体噬菌体抗体库特异性可变区基因基因序列分析制备轻链可变区筛选组织培养鉴定
摘要：目的由已构建的人源单链可变区噬菌体抗体库中制备出抗SSA/Ro单克隆抗体,并对这些抗体的基因序列进行分析.方法将冻存的抗体库菌种复苏制备噬菌体抗体库.用PCR、基因序列分析及酶切的方法对其进行鉴定.以组织培养皿法对该噬菌体抗体库进行富集筛选,用ELISA方法对富集后次级抗体库进行鉴定.制备单克隆抗体并鉴定其特异性,对单克隆抗体的可变区基因序列进行测序分析.结果所制备的噬菌体抗体库的滴度为1.6×1012 cfu/ml,外源基因的插入重组率为80%,插入片断为人抗体可变区基因,且该抗体库具有良好的多样性.富集筛选回收的噬菌体数逐渐增加,富集后的抗SSA/Ro噬菌体抗体次级库吸光度(A)值为富集前的2.8倍,且该次级库有良好的抗SSA/Ro特异性.经富集制备出5个特异性抗SSA/Ro单克隆抗体,这些单克隆抗体重链及轻链可变区基因分别与VH1、VH3、VH4、Vκ1、Vκ2、Vκ3基因家族有高度同源性.结论本实验室构建的scFv噬菌体抗体库可以用于特异性抗体的筛选及单克隆抗体的制备.制备出的抗SSA/Ro单克隆抗体可变区基因序列与人胚系基因比较有突变,为研究相关疾病的发病机理开创了新的途径.
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