作者：朴文花; 何豫; 席宏丽; 孙新婷; 张恒辉; ...四聚体ctl丙型肝炎特异性体外hcv原核表达载体纯化复性
摘要：目的分别构建乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)特异的HLA-A2肽四聚体,为检测乙、丙型肝炎患者体内特异性的细胞毒T细胞(CTL)提供直接、有效的方法,指导临床用药.方法分别构建含有HLA-A2-BSP(含有15个可供识别生物素化的氨基酸位点)和β2微球蛋白(β-2m)基因的原核表达载体,并进行表达、复性、鉴定及纯化.再分别将HBV和HCV特异性短肽与HLA-A2-BSP和β-2m蛋白在体外进行耦合,该复合物经纯化浓缩后进行生物素化.生物素化的产物经纯化浓缩后形成单体,此单体再与藻红蛋白标记的链霉亲和素按一定比例耦合构建成四聚体,最后进行流式细胞仪检测.结果获得了高效、稳定的pBV220-HLA-A2-BSP和pBV220-β-2m原核表达载体,表达量分别占菌体的46%和26%左右;纯度达90%以上.构建的四聚体可成功的检测急、慢性乙型和丙型肝炎患者中特异性的CTL,急性HBV感染时CTL占1.84%,慢性HBV感染时CTL占0.02 %～0.68 %,慢性HCV感染的CTL占0.02～0.72%.结论高效、稳定的pBV220-HLA-A2-BSP和pBV220-β-2m原核表达载体大量的表达可用于构建各种肽特异性的四聚体复合物;在体外构建的MHC -Ⅰ类分子四聚体,为特异性细胞毒T细胞的检测提供有效的工具.
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