作者：许慧; 倪安平; 卢朝辉; 陈杰单克隆抗体特异性反应sars冠状病毒肺组织阳性抗sa尸检标本杂交瘤细胞呼吸道病原体筛选
摘要：目的制备抗SARS冠状病毒的单克隆抗体,用于SARS的实验室诊断.方法灭活SARS冠状病毒(PUMC01)全病毒免疫BALB/C小鼠,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(NS-1)融合,用酶联免疫吸附试验(ELISA)、间接免疫荧光法(IFA)及免疫印迹法对所获得的细胞克隆进行筛选和鉴定,并用其中一株(M2)杂交瘤诱生的腹水单克隆抗体对SARS患者尸检肺组织切片进行免疫组织化学染色. 结果共筛选出6株杂交瘤细胞,ELISA及IFA法证实其分泌的单克隆抗体与SARS冠状病毒有特异性反应,与其他常见呼吸道病原体均无交叉反应.免疫双扩散方法鉴定1株杂交瘤细胞(M2)为免疫球蛋白IgG3型,其余5株均为IgG1型.免疫印迹试验显示1株杂交瘤细胞(M2)分泌的抗体与相对分子质量68 000的蛋白有特异性反应;4株杂交瘤细胞分泌的抗体与相对分子质量27 000的蛋白有特异性反应,1株在免疫印迹上未见到结果.SARS患者尸检肺组织病理切片免疫组织化学染色阳性,在肺泡上皮细胞、支气管上皮细胞及巨噬细胞的胞浆均可见阳性颗粒.结论我们制备的6株单克隆抗体是抗SARS冠状病毒的特异性单克隆抗体,用于SARS尸检肺组织免疫组化染色,结果阳性.
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