作者：鲁玲玲; 苏月; 段春礼; 赵春礼; 苏玉金; ...多巴胺帕金森病治疗脑内表达相关基因模型大鼠合成酶目的基因单基因
摘要：目的探讨重组多巴胺合成酶基因在体内外的表达、生成蛋白的活性及对帕金森病模型大鼠的治疗作用.方法在腺相关病毒介导下,将多巴胺合成酶相关基因酪氨酸羟化酶(TH)基因、芳香族氨基酸脱羧酶(AADC)基因与GTP环化水解酶Ⅰ(GCH-Ⅰ)基因导入COS7细胞,分别通过原位杂交与免疫组化的方法检测目的基因的转录与表达,通过高压液相分析检测酶活性.将携带目的基因的运载细胞移植到帕金森病模型大鼠纹状体,每周进行诱发旋转行为的检测.10周后高压液相分析脑内多巴胺含量,以进一步评估复合基因的治疗效果.结果重组多巴胺合成酶基因在体外可以表达并被正确修饰,具有联合酶促催化功能.当把表达TH、AADC与GCH-Ⅰ基因的细胞共培养时,在底物左旋酪氨酸存在的情况下,可以生成大量多巴胺.而且,把携带治疗基因的细胞移植到大脑后,经检测三基因移植组脑内多巴胺的生成量较单基因移植组多,且前者与后者相比,其行为学改善更为明显.但是三基因移植组与双基因组相比,脑内多巴胺生成量差异无显著意义.结论在帕金森病基因治疗策略中,应根据多巴胺能神经元的损伤程度来选择加入基因的组合量.复合基因治疗的效果明显好于单基因.
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