作者：熊自忠; 妹; 汪复; 张婴元编码基因功能表达头孢噻肟大肠杆菌克雷伯氏菌
摘要：目的了解上海华山医院临床分离大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产生的超广谱β-内酰胺酶(ESBL)的基因型及其流行情况.方法双纸片法和美国国家临床实验室标准委员会(NCCLS)表型确定实验检测产ESBL菌株并对产ESBL菌株进行接合实验;提取产ESBL菌株及其转移接合子中的质粒,进行电泳分析;采用琼脂稀释法,测定各种菌株对多种抗菌药物的敏感性;TEM、SHV、CTX-M-1组、CTX-M-13组、Toho-1组通用引物检测产ESBL菌株及其转移接合子;编码框以外设计引物、聚合酶链反应(PCR)扩增转移接合子中的CTX-M-13组全编码基因,克隆入pHSG398质粒、表达,并对PCR产物进行测序,分析其基因型;对这些产ESBL菌株进行脉冲场电泳(PFGE)检测.结果产ESBL菌株对多种β-内酰胺类和非β-内酰胺类抗生素耐药;产ESBL菌株可通过接合转移方式传递其耐药性,转移频率多为10-4～10-5,多数非β-内酰胺类抗生素的耐药性可以和ESBL耐药性发生共转移,琼脂糖电泳显示接合子从供体菌得到了一个>23.1 kb的质粒;转移接合子中仅CTX-M-13组通用引物检测为阳性;4株转移接合子中CTX-M-13组全编码基因序列与CTX-M-14 编码基因序列的同源性为100%,其余6株转移接合子中CTX-M-13组全编码基因序列与CTX-M-24 编码基因序列的同源性为100%;CTX-M-14和CTX-M-24是由质粒(>23.1 kb)所介导;产CTX-M-14和CTX-M-24转化子菌株对多数的β-内酰胺类抗生素耐药,对头孢噻肟耐药水平高于头孢他啶;这些菌株间的PFGE谱型不同.结论临床分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产生CTX-M-14和CTX-M-24,可导致对大多数的β-内酰胺类抗生素产生耐药性;这些菌株中未发现菌株间的克隆传播.
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