作者：杨玉菊; 王君伟; 李曦; 杨志; 何海娟鹅副粘病毒np基因克隆原核表达抗原性检测
摘要：根据GenBank中发表的GPMV SF02株的NP基因的核苷酸序列设计合成一对引物,通过RT-PCR扩增JS/1/97/Go株的NP基因,将其克隆入pMD18-T载体,序列测定和分析表明:所扩增的NP基因的核苷酸长为1 470 bp,共编码490个氨基酸.再将NP基因定向亚克隆至原核表达载体pGEX-6P的多克隆位点,经酶切鉴定后将含有NP基因的阳性亚克隆重组质粒转化到大肠杆菌BL21中,用诱导剂IPTG分别以不同的浓度进行诱导,并在不同的诱导时间进行采样,样品经处理后通过SDS-PAGE、Western blot和Dot-ELISA进行分析.结果显示:以终浓度为1 mmol/L IPTG进行诱导4 h表达可达到高峰,表达的融合蛋白大小约为80kD,并具有良好的抗原性.
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