作者：李林强; 田万强; 昝林森牛瘦素受体ig基因克隆表达
摘要：[目的]以秦川牛为研究对象,克隆、原核表达秦川牛瘦素受体（Lepr）基因的蛋白功能区,分析表达蛋白对瘦素结合特性,为研究瘦素受体与瘦素结合的调节机制提供理论基础。[方法]本研究通过RT-PCR法从秦川牛肉mRNA扩增获得Lepr IG基因的cDNA序列,克隆至pMD18-T载体获得重组质粒,并进行序列测定。将测序正确的cDNA序列定向克隆到pET30a（NdeI/XhoI）,构建表达载体,并转化BL21（DE3）大肠杆菌,IPTG诱导后进行SDS-PAGE分析,镍柱亲和层析法分离纯化融合蛋白,高效液相色谱—迎头法分析重组表达蛋白对廋素结合功能。[结果]表明秦川牛Lepr IG基因在大肠杆菌中获得高效表达;Lepr IG融合蛋白以可溶性和包涵体2种形式表达;高效液相色谱—迎头分析法进一步表明重组表达蛋白具有结合瘦素的功能。[结论]秦川牛Lepr IG基因在大肠杆菌中获得高效表达,表达蛋白具有结合瘦素的功能,为通过调节瘦素受体对瘦素结合,抑制能量代谢,促进秦川牛脂肪沉积奠定了基础。
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