作者：侯颖; 李文蓉; 谭立新; 牛志刚转染效率血清脂质体介导法流式细胞仪检测dna剂量羊胎山羊体细胞胎儿成纤维细胞
摘要：为建立脂质体介导的高效体细胞转染体系,采用脂质体TransfastTM包裹编码增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的pCMV-EGFP质粒,转染5～13代山羊胎儿成纤维细胞,并用流式细胞仪检测不同DNA剂量、细胞汇合度、血清、转染时间及脂质体与DNA比例等参数对转染效率的影响.实验发现0.75 μg DNA按1∶1的脂质体与DNA比例,在无血清条件下转染汇合50%细胞3 h,转染效率最高可达40.7%±5%.4 h转染时间、细胞汇合80%及转染体系中有血清会降低转染效率.随着DNA剂量的增加,转染效率呈剂量依赖性增高,但山羊成纤维细胞的活细胞数显著下降.实验表明TransfastTM能高效安全地介导外源基因转染山羊成纤维细胞.
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