作者：袁建林; 薛丽; 白玉杰; 赵锦荣; 杨芳; 武...分辨率基因型分析方法焦磷酸微测序技术器官移植
摘要：目的采用焦磷酸微测序技术,建立一种高通量、高分辨率的HLA-DRB基因型分析新方法,为临床应用提供依据.方法对HLA-DRB外显子2 DNA序列进行同源性分析,设计PCR引物,提取健康人外周血淋巴细胞基因组DNA,PCR扩增外显子2基因片段,克隆构建含有外显子2的重组质粒pMD/DRB3*02023.扩增产物经链亲和素包被磁珠纯化、变性、分离制备单链DNA测序模板,采用PSQ96焦磷酸测序仪进行实时测序,分析判断HLA-DRB基因型.结果扩增并克隆了HLA-DRB外显子2,焦磷酸微测序结果与克隆质粒常规测序结果比较,测序正确,与HLA数据库基因序列比较,可准确进行HLA-DRB基因型分析.采用重组质粒pMD/DRB3*02023和pMD/DRB1*0405等比例混合模拟杂合子基因型,焦磷酸微测序分析获得预期结果.结论焦磷酸微测序技术应用于HLA-DRB基因型分析具有高分辨率和快速等优点,可有效分析杂合子基因型,该新方法有望应用于器官及骨髓移植的供体/受体筛查.
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