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大鼠肾脏哺乳动物雷帕霉素靶蛋白随增龄变化的研究

作者:卓莉; 蔡广研; 刘伏友; 陈俊香; 张四方; ...他克莫司结合蛋白质类肾小球系膜细胞细胞衰老

摘要:目的研究大鼠肾脏哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)随增龄表达的变化规律。方法选取3月龄、12月龄及24月龄健康大鼠,分别取大鼠肾组织及原代系膜细胞做衰老相关β-半乳糖苷酶活性(SA-β-gal)染色,采用反转录多聚酶链反应(RT-PCR)和Western印迹法(Western blot assay)分别在基因及蛋白质表达水平上检测肾脏组织和细胞中mTOR及磷酸化mTOR(p-mTOR)的表达变化,采用免疫组化和荧光法分别检测mTOR在肾组织及细胞中的表达与定位。结果随增龄,大鼠肾脏组织SA-β-gal活性增强,且肾小球系膜细胞SA-β-gal染色阳性率逐渐增加,3、12及24月龄阳性率分别为(11.93.6)%,(39.0±4.0)%及(86.9±7.4)%,mTOR mRNA表达随增龄逐渐增强,不同月龄比较差异有统计学意义(P〈0.05)。Western印迹亦显示mTOR及p-mTOR蛋白表达随鼠龄增加逐渐增强(P〈0.05)。免疫组化结果显示,mTOR蛋白表达于大鼠肾小球系膜区,其在肾小管-间质也有表达;随增龄,与增龄所致的肾脏病变呈正相关性(与增龄引起小球及小管-间质病变的相关性分别为r=0.838;r=0.742,均为P〈0.01);免疫荧光结果显示,mTOR在大鼠系膜细胞胞浆及胞核内皆有表达,随增龄表达的荧光强度逐渐升高(P〈0.05)。结论mTOR在大鼠肾组织及肾小球系膜细胞中的表达随龄增加,其可能参与了肾脏衰老的进程。

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