作者:王岚; 孙圣刚; 曹学兵; 张振涛; 徐丽内质网细胞凋亡多巴胺帕金森病
摘要:目的探讨内质网应激反应(endoplasmic retieulum stress response,ERS)及相关凋亡途径在多巴胺能神经元变性死亡中的作用。方法6羟基多巴胺(6-OHDA)、N-甲基-4苯基吡啶离子(MPP^+)、鱼藤酮作用于神经生长因子(NGF)诱导的PC12细胞,MTT及流式细胞仪方法检测各种药物的神经毒性作用及细胞凋亡率,应用RT-PCR和Western印迹技术观察以上药物处理后ERS通路中XBP1、Grp78、CHOP表达水平的变化及相关凋亡因子caspase-12的活化和利血平耗竭胞内多巴胺水平后的影响。结果3种神经诱变剂处理PC12细胞后,细胞活力呈浓度依赖性下降,其中6-OHDA 100μmol/L、MPP^+ 75μmol/L、鱼藤酮20nmol/L作用24h使细胞活力分别下降52%、44%、40%。流式细胞仪显示的细胞凋亡率在8h、16h、24h内逐渐增高(P〈0.01)。RT—PCR及免疫组化检测显示处理后XBP1、Grp78表达和CHOP的基因及蛋白表达水平明显增加,分别在8h、16~24h达到高峰(P〈0.01)。caspase-12 mRNA水平也在诱导后16h显著升高(P〈0.01),利血平预处理使其基因表达减弱(P〈0.05)。结论内质网应激和相关凋亡途径是多巴胺能神经元选择性变性死亡的内在环节之一。
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