作者：张文华; 王晓民; 吴承远gdnf多巴胺能神经元酪氨酸羟化酶保护作用稳定表达对照组工程细胞阳性克隆pcdna3
摘要：目的将人的酪氨酸羟化酶(hTH)和胶质细胞源性神经营养因子(hGDNF)基因共同转染SH-SY5Y细胞,筛选可同时高效稳定表达TH和GDNF的工程细胞,探讨其在帕金森病(PD)基因治疗中的作用. 方法将hTH和hGDNF cDNA插入表达载体pcDNA3.0和pcDNA3.1,构建重组真核表达载体pcDNA3.1/hGDNF和pcDNA3.0/hTH,然后转染至SH-SY5Y细胞系,利用RT-PCR鉴定和筛选出高效稳定表达阳性克隆.将此工程细胞与大鼠原代多巴胺能神经元共培养,免疫细胞化学检测观察多巴脂能神经元的数目和生长状态. 结果 (1)双转基因工程细胞可防止多巴脂能神经元退变死亡,与对照组比较,神经元数目最多提高了2.8倍(P＜0.01);(2)工程细胞可抵抗N-甲基-苯基吡啶(MPP+)对多巴脂能神经元的毒性损伤作用,与对照组比较,细胞数目增加了83.6%(为7.6倍,P＜0.01). 结论首次成功建立了可同时高效稳定表达人TH和GDNF双基因的工程细胞,对多巴脂能神经元有防、治兼顾的保护作用.
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