hIGF-1基因改良修饰人脐血间充质细胞的研究

作者：孙一; 李大伟; 张海宁胰岛素样生长因子1脂质体间充质干细胞基因转染

摘要：目的 研究hIGF-1基因改良修饰人脐血间充质干细胞的方法, 为关节软骨组织工程修复提供良好的种子细胞.方法 综合应用密度梯度离心法和细胞贴壁法分离培养人脐血间充质干细胞,流式细胞仪进行细胞鉴定.通过X-tremenHP介导将含hIGF-1基因全长的真核表达载体pIRES2-EGFP-hIGF-I转染人脐血间充质干细胞, 倒置荧光显微镜检测转染后荧光蛋白的表达, 计算转染效率,ELISA检测转染后细胞上清液中hIGF-1的含量变化, 免疫荧光与RT-PCR检测hIGF-1在细胞中的表达,免疫组化检测Ⅱ型胶原表达.结果 人脐血间充质干细胞表面表达CD105 （99.93%）、 CD90 （99.85%）、CD146 （73.63%）, 不表达Anti-HLA-DR （1.38%）、 CD45 （0.13%）、 CD34 （0.11%）.hIGF-1基因可在X-tre-menHP介导下转染人脐血间充质干细胞, 48 h转染效率为 （29±8） %.转染后48 h分泌的hIGF-1最多,为 （34.89±0.38） ng/ml, 且与对照组相比, 差异具有统计学意义 （P〈0.01）.转染后细胞可检测到hIGF-1mRNA、 蛋白以及Ⅱ型胶原表达.结论 hIGF-1基因可通过X-tremenHP介导改良修饰人脐血间充质干细胞, 促进hIGF-1和Ⅱ型胶原的表达与分泌.

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