作者：林志; 胡永斌; 冯德云; 初令; 王金胜; 曾...二氧化硅纤溶酶原激活剂上皮细胞westernblot逆转录聚合酶链反应免疫细胞化学sp法核蛋白表达
摘要：目的研究SiO2对人肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549)中纤溶酶原激活物抑制因子-1(PAI-1)及激活蛋白-1(AP-1)表达的影响,探讨SiO2致肺纤维化的发病机制.方法按SiO2(200 μG/ml)与A549细胞共育时间的不同,实验分SiO2刺激0、4、8、16、24 h组.利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Westernblot及免疫细胞化学SP法检测细胞PAI-1 mRNA和蛋白的表达;AP-1(c-jun/c-fos)总蛋白及核蛋白表达的检测采用Western blotting.结果SiO2刺激后,实验组PAI-1 mRNA及蛋白表达强度随时间延长依次增强,呈直线正相关(r mRNA=0.911,r蛋白=0.902,P＜0.05),且实验组PAI-1蛋白表达均高于对照组(0.36±0.03),其中24 h组(0.73±0.01)表达最强;c-jun和c-fos核蛋白的表达亦明显高于对照组(0.52±0.02、0.15±0.01),c-jun核蛋白的表达4 h组(1.54±0.02)最强;c-fos核蛋白表达8 h组(0.36±0.01)最强;c-jun和c-fos核蛋白的表达均从孵育16 h开始逐渐下降.AP-1(c-jun/c-fos)总蛋白的表达各组间差异无统计学意义(P＞0.05);PAI-1阳性信号定位于胞浆和胞核.结论SiO2能够诱导A549细胞PAI-1的表达,呈现出明显的时间-效应关系,核转录因子AP-1在SiO2刺激的早期被激活.
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