作者：闫克夏; 刘秉慈; 史香林; 张相民; 尤宝荣...cdk4恶性转化细胞反义细胞周期蛋白依赖激酶基因mrna表达蛋白表达倍增时间人细胞克隆形成能力
摘要：目的探讨细胞周期蛋白依赖激酶K4(CDK4)在石英致人胚肺成纤维细胞(2BS)恶性转化过程中所起的作用,为石英致癌机制提供理论依据.方法用基因重组和基因导入的方法将表达反义CDK4 RNA的pXJ41-CDK4导入石英恶性转化的2BS细胞中.采用原位杂交和免疫组化方法检测细胞中CDK4基因表达情况,分析反义CDK4 RNA导入前后,细胞生长速度、倍增时间、细胞周期分布、软琼脂克隆形成能力的改变.结果石英诱导2BS细胞恶性转化过程中CDK4基因过表达,CDK4基因mRNA表达水平的平均灰度值由26.58±4.78增加到303.47±72.39,蛋白表达水平平均灰度值由28.37±6.09增加到255.82±28.33;反义CDK4 RNA可抑制石英恶性转化细胞的生长增殖,CDK4基因mRNA表达从303.47±72.39降至43.73±10.12,蛋白表达从255.82±28.33降至41.92±3.25.与石英恶性转化细胞相比,反义pXJ41-CDK4转染细胞培养至第8天时,生长速率下降77.43%;倍增时间从21.0 h延长到42.7 h;G1期细胞比例从45.1%增加到58.0%,S期由40.3%下降到30.0%;克隆形成率明显下降,且克隆明显变小.结论CDK4的异常表达与石英恶性转化细胞有密切的关系,高水平表达的CDK4对维持恶性转化细胞的恶性性状起重要的作用.
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