作者：孙路萍; 章小缓; 杨锦鸿; 刘杨澜; 欧玉雪...烯醇化酶念珠菌白色中性白细胞外网
摘要：目的 通过重组白色念珠菌烯醇化酶（enolase）,研究其对人中性粒细胞的作用。方法 采用分子克隆法,构建质粒、克隆、表达、纯化白色念珠菌重组enolase,密度梯度离心法提取人中性粒细胞,通过2,7-二氯二氢荧光素二醋酸酯（DCFH-DA）法、Sytox green染色和免疫荧光观察白色念珠菌重组enolase（500 nmol/L）对人中性粒细胞的刺激作用。中性粒细胞加入白色念珠菌SC5314（中性粒细胞∶白色念珠菌=5∶1）作为阳性对照组（SC5314组）,未加刺激的作为阴性对照组。采用单因素方差分析（One-Way ANOVA）及Tukey′s检验对数据进行统计分析。结果 成功得到重组enolase,分子量为46 kDa。重组enolase可以刺激人中性粒细胞产生细胞内活性氧（ROS）,enolase组与SC5314组产生ROS的量均无明显差异。Sytox green对胞外DNA定量及免疫荧光观察,均显示重组enolase可以刺激人中性粒细胞产生中性粒细胞外网（NETs）。NETs定量结果显示,enolase组[（11.0±2.5）%]与SC5314组[（12.4±2.0）%]在2 h时无明显差异（F=6.13,P=0.0886）,在4 h时enolase组[（22.2±2.0）%]显著低于SC5314组[（31.4±3.1）%],差异有统计学意义（F=9.745,P=0.0370）。结论 白色念珠菌enolase可以诱导人中性粒细胞形成NETs。
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