作者:林梅; 杨秋波; 杨圣辉紫单胞菌龈血凝素类基因打靶血液凝固
摘要:目的构建牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)血凝素2(hemagglutinin—adhesin2,HA-2)基因缺陷型突变株,为研究HA-2基因功能奠定基础。方法PCR扩增PgHA-2基因两翼片段HAu、HAl,将抗性基因ermF—ermAM连接到两者之间构建打靶载体HA—ermF—ermAM。将HA—ermF—ermAM电转化PgATCC33277,基因同源重组整合进入PgATCC33277染色体,用选择性培养基筛选获得PgATCC33277HA-2基因缺陷型突变株。进行PgATCC33277HA.2基因缺陷型突变株与其野生株凝血功能试验,比较二者的凝血功能差异。结果PCR、酶切和测序鉴定结果表明,打靶载体HA—ermF—ermAM成功构建。经PCR鉴定,打靶载体HA—ermF—ermAM通过同源重组整合进入PgATCC33277染色体,成功获得PgATCC33277HA-2基因缺陷型突变株。凝血实验结果表明,PgATCC33277HA-2基因缺陷型突变株与野生株相比凝血能力明显减弱。结论成功获得PgATCC33277HA-2基因缺陷型突变株,为进一步研究HA-2的生物学性质奠定了基础。
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