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反义寡脱氧核苷酸对耻垢分枝杆菌抑制作用的研究

作者:黄海荣; 赵雁林; 张宗德; 于霞; 刘冠寡脱氧核糖核苷酸类反义分枝杆菌耻垢结核

摘要:目的研究反义寡脱氧核苷酸对耻垢分枝杆菌生长的抑制作用,探讨其潜在的抗结核作用。方法在7H9培养基中接种5×10^5 CFU耻垢分枝杆菌MC^2 155,同时加入20μmol/L针对结核分枝杆菌中必须基因Rv3806c在耻垢分枝杆菌中的同源基因MSMEG_6401的反义寡脱氧核苷酸。以耻垢分枝杆菌MC^2 155单独培养作为对照。观察和绘制细菌生长曲线;测定细胞膜MSMEG_6401编码的磷酸核糖转移酶的生物活性;应用高压气相色谱测定耻垢分枝杆菌细胞壁中糖的含量。结果anti-ODNs作用6d后的耻垢分枝杆菌平均吸光度值(A值)为0.84±0.09;而野生型耻垢分枝杆菌平均A值为1.27±0.01,试验组耻垢分枝杆菌较对照组增殖速度平均降低0.45(P〈0.01);anti-ODNs作用6d后耻垢分枝杆菌平均CFU计数的对数值为8.27±0.19;而野生型耻垢分枝杆菌平均CFU对数值为8.89±0.14,试验组耻垢分枝杆菌较对照组增殖速度平均降低0.62个log单位;在应用等量的膜蛋白的情况下,实验组磷酸核糖转移酶的生物活性降低约40%;试验组和对照组细菌反映细胞壁糖含量的指标甘露糖-半乳糖/阿拉伯糖比值没有明显差异(2组实验组分别为0.63和0.69;2组对照组分别为0.67和0.69)。结论针对MSMEG_6401的反义寡脱氧核苷酸对耻垢分枝杆菌的增殖有一定程度的抑制作用,推测反义寡脱氧核苷酸技术有一定抗结核价值;结核分枝杆菌的Rv3806c基因或是其编码产物可能是一个好的抗结核药物作用靶位。

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