作者：王娟; 陈美珏; 巩芷娟; 任兆瑞; 曾凡一; ...流式细胞术造血干细胞移植嵌合体抗原表面
摘要：目的建立应用流式细胞术检测人／山羊嵌合体中人源细胞的方法。方法通过宫内移植的方法将标记有绿色荧光蛋白（GFP）的人造血干／祖细胞（MIG细胞）移植入胎山羊腹腔内，从而获得人／山羊嵌合体模型（MIG羊）。采集MIG羊的外周血，以数十种鼠抗人的抗体标记，筛选出对人源细胞特异性强而与山羊细胞无或仅有微弱交叉反应的抗体，列人流式细胞仪常规检测的首选抗体，继而在非移植山羊的外周血中加入不同比例（25％、50％、75％和100％）的人脐血细胞，用CD34^＋表面抗体标记来观察人脐血细胞和人CD34细胞的分布，以决定“门”的区域和大小；取MIG羊的肝脏，应用流式细胞术检测灌流后肝实质细胞中GFP细胞的比例及DNA含量。结果筛选出CD7、CD15、CD38、CD45、CD20、CD34、CD14和血型糖蛋白A（GPA）等8种单抗作为检测嵌合体中人源细胞的首选抗体；确定了进行流式细胞分析时“门”的大小和区域；MIG羊肝实质细胞中，GFP^＋细胞的比例为29．1％（29100／100000）；DNA含量测定结果显示MIG羊肝组织分选获得的GFP^＋细胞主要呈现2个峰，其位置与人的双峰位置相对应。结论流式细胞术是研究干细胞在体内分化、归巢和生物学特征的快速、简便、有效的方法；表面抗体以及“门”的选择对于准确检测人／山羊嵌合体中人源细胞至关重要。
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