作者：单志娟; 项金忠呼吸道合胞病毒病毒融合蛋白质类杆状病毒科真核细胞印迹法蛋白质
摘要：目的研究人呼吸道合胞病毒（RSV）F基因第546～881碱基编码的融合蛋白（即F蛋白）主要抗原性区域第168～289氨基酸片段的抗原性初步探讨其作为诊断抗原的应用价值。方法用逆转录（RT）-PCR的方法扩增出RSVLong株F基因546～881bp片段（F’），将其插入到转移载体质粒pBacPAK9中，获得相应的重组质粒pBacRSVF’，与线性杆状病毒BacPAK6DNA（Bsu36I酶切）共转染Si9昆虫细胞获得重组病毒BacPAKF’，并在昆虫细胞中表达。重组蛋白用Ni2＋螯合柱亲和层析纯化，用免疫印迹（Westernblot，WB）法检测重组蛋白的抗原活性。并用该方法检测33例急性下呼吸道感染患儿血清特异性抗体，同时用间接免疫荧光法检测患儿的鼻咽分泌物中RSV抗原。对两种方法检测标本的阴性率进行比较。结果重组病毒BacPAKF’在昆虫细胞中表达相对分子质量约13000的重组蛋白。纯化后的重组蛋白能与特异性抗RSV抗体结合。WB检测33例急性下呼吸道患儿血清特异性抗体，结果显示阳性11例，阳性率为33．3％，免疫荧光法检测结果阳性9例，阳性率为27．3％，2种检测方法阳性率差异无统计学意义（X2=0．29，P〉0．05）。结论纯化后的在昆虫细胞中表达的RSVF基因546-881bp片段编码的融合蛋白片段具有较强的抗原活性，对RSV感染的快速诊断具有一定的临床应用价值。
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