作者：石岚; 王玉明; 刘华; 聂波; 李惠民聚合酶链反应sybrgreenidna定量定量检测
摘要：目的探讨用改良SYBR green I实时定量PCR（RQ—PCR）技术消除引物二聚体（PDs）对定量分析的影响，建立准确的定量检测DNA含量的方法。方法以β-actin为目的基因，通过对扩增产物和PDs熔解曲线的分析找出各自的解链温度（Tm），选择在高于PDsTin但低于目的片段Tm的温度时检测荧光信号，建立改良SYBR green IRQ—PCR方法。结果该法可消除PDs对SYBR green IRQ—PCR的影响。用此法构建所得标准曲线斜率为－3．178866，相关系数为－0．980535，PCR反应动力学范围达5个log值（10^2-10^6）；精确性检测中，DNA含量实测值与预测值的差异无统计学意义（P〉0．05）；稳定性检测中，3种不同浓度标本的批内变异和批间变异分别为1％、3％、2％和2％、4％、4％。结论改良SYBR green IRQ—PCR可有效消除PDs对定量分析的影响，对目的基因DNA拷贝数进行PCR反应线性范围广、敏感性、精确性和稳定性好的定量检测。是一种简便实用的DNA定量检测的方法。
注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社
