作者：彭建明; 李金明; 徐克前; 王忠芳; 王露楠...风疹病毒病毒样颗粒表达载体包膜蛋白质控品核糖核酸酶标准品核酸序列酶切iptg
摘要：目的构建原核表达系统,表达内含风疹病毒部分核酸序列的由噬菌体包膜蛋白构成的病毒样颗粒,并包被重组RNA,使其具耐核糖核酸酶(RNase)的特性.方法用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增风疹减毒活疫苗中风疹病毒糖蛋白E1的部分保守区域,进行TA克隆后,用限制性内切酶Hind Ⅲ酶切,获得所需要的目的片段,并与用Hind Ⅲ酶切的表达载体pNCCL1相连接,构建一新的表达载体pNCCL1-Ru.再转化E.Coli BL21-DE3,用IPTG诱导表达噬菌体MS2包膜蛋白后,再自我组装成病毒样颗粒,并将风疹病毒部分序列包裹到病毒样颗粒内.结果成功构建了新的表达载体pNCCL1- Ru,其原核表达产物病毒样颗粒中所包裹的风疹病毒RNA序列与风疹BRDⅡ株同源性高达98%,所包裹的RNA具有耐RNase消化的特性以及良好的稳定性.结论我们构建的表达载体pNCCL1- Ru及原核表达系统,可作为构建和制备耐RNase的风疹病毒核酸标准品和质控品的平台,可为实验室进行风疹病毒核酸的检测提供稳定的无传染性的标准品和质控品.
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