作者：吴雪琼; 梁建琴; 曹立雪; 李洪敏; 张俊仙...结核菌突变耐药基因寡核苷酸探针快速检测聚合酶链反应药敏试验密码子pcr产物rpsl基因
摘要：目的应用聚合酶链反应(PCR)-寡核苷酸探针快速检测结核菌耐药基因突变,建立一种新的分子药敏试验方法.方法以传统药敏试验、PCR-单链构象多态性和PCR-直接测序方法为对照,对利福平、链霉素(SM)和乙胺丁醇耐药的结核菌基因rpoB、rpsL、rrs 和embB的寡核苷酸探针,通过反向斑点杂交检测78株结核菌临床分离株PCR产物.结果 18株结核菌药物敏感株的4种耐药基因均为野生型.60株结核菌耐药分离株中,59株为耐RFP株,rpoB基因突变率为93.2%,最常见的突变位点为531位和526位密码子,33株为耐SM株,rpsL基因突变率为75.8%,均为43位密码子AAG→AGG突变,rrs基因突变率为9.1%,均为513位A→C突变,rpsL和rrs基因总突变率为84.8%;43株为耐EMB株,embB基因突变率为58.1%,均为306位密码子突变.结论应用PCR-寡核苷酸探针反向斑点杂交技术可简便、快速、准确地分析大多数结核菌耐药基因突变,检测其耐药性.
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