作者：谢飞; 涂向东; 兰风华; 朱忠勇alt丙氨酸氨基转移酶抗血清天然蛋白可溶性表达假性活性染色克隆表达特异性识别
摘要：目的克隆表达重组人Ⅰ型丙氨酸氨基转移酶(ALT1)蛋白及制备抗血清，探讨建立ALT1特异性检测方法思路。方法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增人ALT1 cDNA，插入pGEX-2T，构建原核表达载体pGEX-2T—ALT1，并转人大肠杆菌进行表达。SDS-PAGE，活力测定和活性染色鉴定表达产物。表达产物免疫小鼠所得抗血清对天然ALT1，重组ALT1及重组ALT2进行Western blot分析。结果重组质粒测序和酶切结果显示ALT1基因已经成功克隆到pGEX-2T载体。SDS-PAGE和活性染色表明所表达蛋白具有天然活性。抗ALT1血清除识别重组ALT1外，还可识别天然蛋白和重组ALT2。结论重组人ALT1得到高效可溶性表达。用目前方法制备的抗血清特异性不高，如建立ALT1的免疫学检测方法需要采用特异性识别ALT1的抗体，以避免交叉反应引起的假性升高。
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