耐他莫昔芬人乳腺癌细胞株的建立及其^18F-FDG摄取的降低机制

作者：林阳; 章斌; 李继会; 邓胜明; 杨剑峰; 何...乳腺肿瘤肿瘤细胞培养的他莫西芬氟放射性同位素脱氧葡萄糖

摘要：目的建立耐他莫昔芬（TAM）人乳腺癌细胞耐药细胞株T47D－TamR，比较其与亲本细胞株T47D在^18F－FDG细胞摄取率上的差异，并进行机制研究。方法采用长时间逐步增加药物浓度冲击法，诱导建立耐TAM人乳腺癌细胞耐药细胞株T47D－TamR。利用MTT法测定耐药株的耐药指数（RI）及增殖能力。分别在不同细胞数、反应时间、^18F－FDG用量及葡萄糖浓度的实验条件下，测定T47D－TamR和T47D细胞的^18F－FDG细胞摄取率。利用试剂盒检测2种细胞内LDH活性、ATP水平及上清液乳酸含量。通过Western blot法检测2组细胞中ERα和Glut－1的表达量及AMPK和mTOR的磷酸化水平。采用两样本t检验或双因素方差分析处理数据。结果成功构建T47D－TamR细胞株，其RI为1.97±0.08，且增殖能力明显低于亲本细胞（F＝230.10，P〈0.05）。分别改变细胞数、反应时间及^18F－FDG用量时，T47D－TamR细胞的^18F－FDG细胞摄取率均低于T47D细胞，2组间差异均有统计学意义（F值：419.00～1 116.00，均P〈0.05）。T47D和T47D－TamR细胞内LDH活性分别为（0.42±0.04）和（0.32±0.02） U/mg蛋白质，ATP水平分别为（19.99±0.32） 和（14.01±0.70） nmol/mg蛋白质，上清液乳酸浓度分别为（2.95±0.05） 和（2.02±0.07） mmol/L，2组间差异有统计学意义（t值：4.39～18.80，均P〈0.05）。T47D和T47D－TamR细胞中ERα、磷酸化AMPK（p－AMPK）、磷酸化mTOR （p－mTOR）、Glut－1的相对表达量分别为0.26±0.03、0.36±0.06、0.75±0.11、0.35±0.07和0.17±0.02、0.61±0.09、0.52±0.08、0.21±0.04，2组间差异有统计学意义（t值：12.20～16.45，均P〈0.05）。结论T47D－TamR细胞的^18F－FDG摄取率、胞内LDH活性、ATP水平及上清液乳酸含量均低于T47D细胞，且其p－AMPK的表达量升高，ERα、p－mTOR、Glut－1的表达量降低，提示耐TAM乳腺癌细胞糖酵解水平降低 。

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