作者：张刚庆; 方驰华; 池达智骨髓祖代细胞肝细胞细胞培养细胞分化骨髓基质干细胞肝细胞生长共同培养逆转录聚合酶链反应大鼠肝细胞
摘要：目的探索大鼠骨髓基质干细胞(MSCs)向肝细胞分化的能力,及肝细胞生长的微环境对其诱导分化的作用. 方法采用梯度离心法,获取大鼠骨髓基质干细胞;改良的两步法获取大鼠肝细胞.将鉴定的MSCs和肝细胞以半透膜相隔共同培养,以单独培养的MSCs作对照.在第1、3、7、14、21、28天,分别以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学分析检测甲胎蛋白(AFP)、白蛋白、细胞角蛋白18(CK-18)的基因和蛋白表达.结果在MSCs与肝细胞共同培养过程中,MSCs出现明显的细胞形态、体积和数量变化,可见双核或多核细胞,细胞轮廓较清晰.RT-PCR检测:共同培养的MSCs第7天即出现AFP基因表达,第14天表达增强,第21天表达减弱;第1 4天开始出现白蛋白、C K-18基因表达,并持续表达.单独培养的MSCs均无表达.共同培养的MSCs,于第7天进行免疫细胞化学检测,A F P即呈阳性;第14天白蛋白和CK-18也呈阳性;单独培养的MSCs未见AFP、白蛋白及CK-18表达.结论大鼠骨髓基质干细胞与肝细胞共同培养,可被诱导分化为肝细胞.
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