作者：王小虎; 李胜保; 谢国建; 易建华; 吴清明腺病毒介导作用反义rna肝癌细胞株细胞生长肿瘤
摘要：目的探讨环氧合酶2(COX-2)的表达与肝癌的关系,并构建表达人COX-2反义RNA的腺病毒载体,研究其对人肝癌细胞生长的抑制作用.方法采用免疫组织化学法探讨34例肝癌组织COX-2的表达与肝癌病理特征的关系.采用基因重组法把人COX-2的cDN段反向克隆于穿梭质粒pHCMVSP1A,获得pAd-AShcox-2,通过脂质体与pJM17共转染293细胞,经同源重组产生编码COX-2反义RNA的重组腺病毒--Ad-AShcox-2.经聚合酶链反应法鉴定为阳性克隆者大量扩增、纯化,转染人肝癌细胞株SMMC-7402和SMMC-7721,采用免疫细胞化学、细胞集落形成率及流式细胞术检测其对肝癌细胞生长、凋亡及细胞周期分布的影响.结果 34例肝癌组织中有2 8例COX-2高度表达,阳性率达82.4%;COX-2的表达水平与肝癌的病理分级有关,与甲胎蛋白、细胞类型、有无肝内转移无关.成功构建、扩增、纯化得到编码COX-2反义RNA的重组腺病毒Ad-AShcox-2,滴度达1.06×1012 PFU/ml;Ad-AShcox2转染两种肝癌细胞株后,发现高度表达COX-2的SMMC-7402 COX-2表达水平明显降低,细胞凋亡率明显增加,出现G1期阻滞,与Ad-LacZ组及空白对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);而不表达COX-2的SMMC-7721变化不明显.细胞集落形成实验显示SMMC-7402细胞集落形成率较低(2.7%±0.94%);而SMMC-7721集落形成率较高(33.6%±4.24%),两组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论COX-2的阳性表达与肝癌细胞生长、分化程度有关,减少COX-2的表达对COX-2表达阳性的肝癌细胞具有抑制作用,而对不表达COX-2的肝癌细胞无抑制作用.
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