作者：季伟; 李海峰; 程实; 陈佳海; 徐成; 刘玥...共培养低氧骨髓间充质干细胞髓核细胞椎间盘细胞治疗
摘要：背景：对于骨髓间充质干细胞（BMSCs）与髓核（NP）细胞共培养的研究主要集中在不同条件下的干细胞向NP细胞表型的分化。一些研究表明,在动物试验中干细胞影响退变的NP细胞。少有研究人BMSCs对NP细胞的影响,特别是在低氧条件下。目的：建立同一患者的BMSCs和NP细胞的共培养模型,探讨在低氧环境下BMSCs对NP细胞的生物学影响。方法：分离培养患者的NP细胞和BMSCs。并将其分为两组。A组为NP细胞单独培养组,B组为NP细胞与BMSCs共培养组。两组细胞均连续培养14 d。通过光学显微镜观察两组细胞形态及数量,用流式细胞仪和扫描电子显微镜（SEM）观察细胞死亡。用细胞计数kit-8试剂盒（CCK8）评估细胞增殖,进一步采用实时/逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞外基质（ECM）和NP细胞特殊表型的标记的表达。结果：培养14 d后,光学显微镜下观察,单独培养组可见NP细胞贴壁和延伸,NP细胞的数量比培养前多。在共培养组,NP细胞形态是纺锤形,贴壁、延伸比单培养组好,NP细胞的数量远远超过培养前,并且多于单独培养组。CCK8检测表明,培养14 d后,与单独培养组相比,共培养组的NP细胞更多（P〈0.05）,单独培养组细胞凋亡率高于共培养组（P〈0.05）。在低氧和与BMSCs共同培养条件下,蛋白多糖（AGG）、胶原Ⅱ（COL2）,SOX-9,角蛋白19（KRT19）,碳酸酐酶Ⅻ（CA12）和低氧诱导因子（HIF）表达增加。RT-PCR检测表明这些基因和蛋白的合成、分泌在与BMSCs共培养的NP细胞组中明显高于NP细胞单独培养组。结论：在体外更接近体内条件的低氧直接共同培养条件下,BMSCs可能会通过调节ECM和调节基因来保护或激活退化的NP细胞。为BMSCs治疗椎间盘退变提供了一个重要的新思路。
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