作者：禄韶英; 隋延仿; 李增山; 叶菁; 王文; 张...afp治疗肝癌egfp全反式视黄酸基因启动子特异性顺式作用元件表达载体报告基因
摘要：目的构建新型AFP顺式作用元件调控的基因表达载体,检测该调控元件的特异性和可调控性.方法 PCR扩增截短的AFP基因启动子、增强子,将上述片段与含有报告基因强化绿色荧光蛋白基因的载体pEGFP-1的多克隆位点连接,构建成为AFP基因顺式作用元件调控的肝癌特异性EGFP表达载体(pEGFP-1-EP).用脂质体法将表达载体转染表达或不表达AFP的肿瘤细胞系,荧光显微镜观测重组AFP顺式作用元件的启动活性,并用流式细胞术检测全反式视黄酸对它的抑制作用.结果成功地将AFP基因启动子、增强子克隆到报告基因载体pEGFP-1的多克隆位点,酶切鉴定和DNA序列分析无误,荧光显微镜观测证实EGFP能在AFP阳性肝癌细胞特异性表达,1×10-7M全反式视黄酸对其活性有明显的抑制.结论 AFP顺式作用元件修饰的基因治疗载体,在基因转录水平特异性调控目的基因的表达,为下一步将其作为肝癌基因治疗载体奠定了基础.
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