作者：徐华; 韩金祥; 高雪芹; 黄海燕; 李钿; 潘...蛋白质阵列分析正交试验免疫系统疾病自身抗体
摘要：目的 优化制备蛋白质微阵列的几个关键因素，初步建立自身免疫性疾病抗体检测微阵列，以期用于自身免疫性疾病的诊断。方法 选择与制备蛋白质微阵列有关的4个因素，即温育时间、封闭剂、封闭时间和与二抗结合时间，进行正交优化，得出制备蛋白质微阵列的最优化条件，并根据该条件，进一步确定6种自身抗原适合的点样浓度及血清的最佳稀释度。根据优化条件，制备出同时检测6种自身抗体的微阵列，并初步应用，与间接免疫荧光（IIF）法和酶联免疫吸附试验（ELISA）法加以比较。对结果进行评价。结果 制备蛋白质微阵列的最佳优化条件是温育2h，封闭剂采用含有1％小牛血清白蛋白和2．5％蔗糖的PBST，封闭时间为30min，与二抗反应30min，6种自身抗原适合点样浓度从100μg/ml到300μg/／ml不等，最佳血清稀释浓度是1：2。微阵列法对抗核抗体（ANA）的检测与IIF法相比。灵敏度是88．6％，特异度是83．3％，微阵列法对其他5种自身抗体的检测与ELISA法相比，灵敏度在80．0％～88．2％之间，特异度在90．2％~98．6％之间。结论 上述优化条件适合于制备自身免疫性疾病抗体检测微阵列．微阵列检测结果与现有常规方法检测结果比较一致，值得推广应用。
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