作者：陈占昆; 吕厚山; 王东; 蒋东芳; 丁海明人类白细胞抗原4基因转基因小鼠southern杂交流式细胞光度术外周血淋巴细胞显微注射技术mrna水平细胞表面表达昆明鼠外源基因hla转基因动物受精卵方法应用蛋白水平基因整合
摘要：目的研究人类白细胞抗原(HLA)-B2704基因在转基因小鼠中的整合与表达.方法应用显微注射技术将HLA-B2704基因注入C57BL/6×昆明鼠和昆明鼠×昆明鼠F0代受精卯,出生动物进行聚合酶链反应(PCR)筛选及Southern杂交鉴定.阳性者进行反转录(RT)-PCR和流式细胞光度术检测其在mRNA和蛋白水平的表达.结果101只F0代仔鼠中,10只F0代仔鼠基因组中有HLA-B2704基因整合.其中昆明鼠×昆明鼠F0代3只,整合率为4.7%,C57BL/6×昆明鼠F0代7只,整合率为18.9%(x2检验,P＜0.05).阳性小鼠的皮肤、结肠、睾丸和脾脏组织中均有HLA-B2704基因的mRNA水平表达,其外周血淋巴细胞膜上HLA-B2704基因的蛋白表达为7.87%(直方图统计表,5%以上为阳性).结论尽管受精卵的注射成活率差异无统计学意义,在注射浓度相同的情况下,含有C57BL/6基因背景的受精卵更易整合外源基因,而单纯昆明鼠的受精卯不易接受外源基因.C57BL/6×昆明鼠F0代比单纯昆明鼠F0代更适合于转基因动物的制备.HLA-B2704的重链分子与小鼠β2微球蛋白结合的复合物不稳定,不易于在细胞表面表达.
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