作者:马丽; 郭万首; 潘林; 吴东海转基因疗法骨关节炎软骨细胞细胞凋亡抑制作用oa
摘要:目的通过白细胞介素-1受体拮抗蛋白(IL-IRa)间接体内转基因治疗试验性兔骨关节炎,探讨IL-IRa对兔膝关节软骨细胞凋亡的抑制作用.方法①30只新西兰大白兔随机分成3组,左膝关节部分滑膜切除,分离并培养滑膜成纤维细胞.②用携带标记基因或IL-IRa基因的逆转录病毒分别转染从第2组或第3组兔膝关节分离出来的滑膜细胞.③兔右膝关节前交叉韧带横断术(ACLT)建立骨关节炎模型.④把自体滑膜细胞回输第1组兔右膝关节腔内,再把转染标记基因或IL-IRa基因的自体滑膜细胞回输第2组或第3组兔右膝关节腔内.⑤2、4周后,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测关节液中IL-IRa水平.⑥TUNEL末端荧光标记法测关节软骨细胞凋亡发生率.结果第3组兔膝关节液中IL-IRa水平,在基因转入关节腔后第2周时为(20.6±1.8)ng/ml,第4周时为(4.82±0.52)ng/ml;而2、4周时,第1、2组中IL-IRa水平均极低.第3组软骨细胞凋亡被抑制,仅有18%发生细胞凋亡,而在第2组关节软骨细胞近40%发生细胞凋亡,正常对照组中只有2%~5%的软骨细胞发生凋亡.结论本试验证明关节腔内注入体外转染IL-1Ra基因的自体滑膜细胞,即IL-1Ra间接体内转基因治疗,能使关节腔局部IL-1Ra水平明显升高,使关节软骨细胞凋亡受到抑制.
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