作者：姜伟 王宜生 丛青 李明江 Bin Ye 徐丛剑卵巢肿瘤肿瘤浸润血小板活化因子camp反应元件结合蛋白质基质金属蛋白酶2
摘要：目的探讨血小板活化因子（PAF）对卵巢癌细胞侵袭的影响及其相关机制，为卵巢癌的治疗提供新的靶点。方法（1）以100nmoL／L的PAF分别处理卵巢浆液性癌细胞株OVCA429细胞及卵巢黏液性癌细胞株RMUG-L细胞，均以仅加入二甲基亚砜（DMSO）为对照，采用体外侵袭实验检测其穿膜细胞数。（2）以不同浓度（分别为0、0．1、1、10、100、1000nmol／L）的PAF处理后检测OVCA429细胞中环腺苷酸应答元件结合蛋白（CREB）、磷酸化CREB（P-CREB）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）蛋白的表达水平；以100nmol／L的PAF处理不同时间（分别为0、5min、10min、30min、1h及12h）后检测OVCA429细胞中有丝分裂原活化蛋白激酶p38蛋白（p38MAPK）、磷酸化p38MAPK（p-p38MAPK）、CREB及p-CREB蛋白的表达水平，上述各蛋白的表达水平均采用蛋白印迹法检测。（3）OVCA429细胞在加入PAF（100nmoL／L）的基础上，分别加入各蛋白的抑制剂，即PAF受体（PAFR）抑制剂-wEB2076（50μmol／L）、p-p38MAPK抑制剂-SB203580（10μmol／L）、CREB结合蛋白（CBP）-CREB相互作用抑制剂卅17505（25μmol／L）。实验分为6组：PAF组、PAF’WEB2076组、PAF＋SB203580组、PAF＋217505组、PAF＋SB203580＋217505组及空白对照组，采用蛋白印迹法检测各组细胞中p-p38MAPK、P-CREB、MMP-2蛋白的表达强度。结果（1）体外侵袭实验显示，予PAF处理后，OVCA429细胞的穿膜细胞数[（118±23）个]明显多于其对照细胞[（36±8）个，P〈0．01]，而RMUG-L细胞的穿膜细胞数[（45±13）个]与其对照细胞[（53±9）个]比较无明显变化（P〉0．05）。（2）不同浓度的PAF处理后，OVCA429细胞中p-CREB、MMP-2蛋白的表达水平呈明显的剂量依赖性（P〈0．01），0．1nmol／L的PAF即可引起p-CREB、MMP-2蛋白表达水平日月显升高，至100nmol／L时达高峰；而CREB蛋白的表达无明显变化。100nmol／L的PAF处理不同时间后，O
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