作者：沈红玲 陈汉平细胞外信号调节map激酶类妊娠蛋白质类脐静脉内皮细胞一氧化氮
摘要：目的探讨细胞外信号调节蛋白激酶（ERK）通路在胎盘生长因子1（PLGF-1）诱导脐静脉内皮细胞（HUVEC）释放一氧化氮（NO）中的作用。方法选择因头盆不称、胎儿窘迫或胎位异常行剖宫产分娩的新生儿50例，采用胰蛋白酶消化法进行脐带HUVEC原代培养。（1）培养成功后，用免疫组化法通过Ⅷ因子鉴定细胞形态；（2）用蛋白印迹法和RT—PCR技术检测HUVEC中酪氨酸激酶受体1（Flt-1）蛋白和mRNA表达；（3）用浓度为10ng／ml的PLGF-1培养细胞（观察A组），并在培养前及培养后2．5、5、10、20min收集细胞，提取蛋白，用蛋白印迹法检测ERK蛋白的表达；（4）用浓度为10ng／ml的PLGF-1培养细胞，收集培养后20、40、160、360、480、720、1440min的细胞培养液，用硝酸盐还原酶法检测培养液中NO的含量；（5）先用含ERK特异性抑制剂——PD98059（100μmol／L）的培养基培养细胞60min后，换含PLGF-1的培养基继续培养（观察B组），收集培养后20、40、160、360、480、720、1440min的细胞培养液，用硝酸盐还原酶法检测培养液中NO的含量。以无血清培养基培养的细胞为对照组，细胞处理时间、培养条件和收集细胞液时间同观察组。实验重复3次。结果（1）免疫组化鉴定培养的细胞为HUVEC。（2）HUVEC中有Fit-1mRNA和蛋白的表达。（3）观察A组PLGF-1培养HUVEC后2．5min即有ERK蛋白表达强度的升高，5min时表达强度达到高峰，10min时表达强度降低。（4）PLGF-1培养20min后HUVEC培养液中NO含量开始升高，为（6．96±0．34）μmol／L，培养40min时NO含量为（9．45±0．59）μmol／L，培养360min时NO达（15．82±0．69）μmol／L，各时间点NO含量比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。（5）观察B组NO释放显著受到抑制，从培养160min到1440min，NO含量下降达50％以上。结论ERK通路可能是PLGF诱导HUVEC释放NO的重要信号通路之一。
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