作者：张娟; 林仲秋; 彭永排; 张丙忠; 周晖; 杨...人乳头状瘤病毒16型重组腺相关病毒载体真核细胞mrnahpv16e7基因hek293细胞斑点杂交法aav载体反向重复序列病毒颗粒病毒滴度蛋白印迹法重组质粒鉴定结果细胞内验证细胞系胚胎肾p基因rep
摘要：目的构建含人乳头状瘤病毒16型E7(HPV16E7)基因的重组腺相关病毒(rAAV)载体,并验证HPV16E7 mRNA和蛋白在真核细胞中的表达.方法将含腺相关病毒(AAV)末端反向重复序列及HPV16E7基因的重组质粒pAAV-MCS-E7、含rep/cap基因的质粒pAAV-RC及辅助质粒pAAV-helper共同转染胚胎肾细胞系HEK293细胞,回收、纯化病毒颗粒并鉴定,斑点杂交法测定病毒滴度, RT-PCR技术、蛋白印迹法验证HPV16E7 mRNA和蛋白在真核细胞中的表达.结果电镜鉴定结果显示真核细胞中有病毒颗粒存在,斑点杂交法测定病毒滴度为1×1011/ml.含HPV16E7基因的rAAV载体转染真核细胞后, 在细胞内可检测到HPV16E7 mRNA和蛋白的表达.结论本实验成功构建了含HPV16E7基因的rAAV载体,经验证HPV16E7 mRNA和蛋白在真核细胞内有表达.
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