作者：刘艳洁 高勤 唐智 张雪玲 官志忠神经型尼古丁受体丝裂原活化蛋白激酶人神经母细胞瘤细胞系
摘要：目的 观察神经型尼古丁受体α3亚单位（α3nAChR）及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路中细胞外调节蛋白激酶（ERK1/2）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）、p38激酶在氟暴露神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y中的表达,探讨过量氟暴露对细胞形成损害的信号传递机制.方法 以α3nAChR基因沉默的SH-SY5Y细胞作为α3nAChR沉默组,以正常SH-SY5Y细胞作为对照组,采用蛋白印迹法和实时荧光定量PCR法检测α3nAChR基因沉默效果.分别用0.000、0.005、0.050、0.500、1.000、2.500、5.000 mmol/L氟化钠（NaF）处理正常SH-SY5Y细胞,用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞存活率,筛选染氟安全浓度.根据染氟安全浓度筛选结果,选择4.000 mmol/L NaF处理α3nAChR沉默组和对照组SH-SY5Y细胞0、4、8、12、24、36、48 h,用蛋白印迹法检测细胞中ERK1/2、JNK、p38蛋白表达.结果 基因沉默效果检测结果显示,在α3nAChR沉默组,α3nAChRmRNA（0.04±0.03）和蛋白（12.0±2.5）表达明显低于对照组（1.00±.11、100.0±11.3,t=24.58、28.80,P均＜ 0.05）.筛选染氟安全浓度结果显示,在染氟5.000 mmol/L组,SH-SY5Y细胞存活率（0.53±0.15）明显低于0.000 mmol/L组（1.05±0.05,P＜0.05）,而其他染氟剂量组未见明显改变（P均＞0.05）.随着染氟时间延长,α3nAChR沉默组和对照组磷酸化ERK1/2表达逐渐升高,其中24、36、48 h（188.33±7.33、200.00±10.01、213.33±11.55,125.33±5.69、136.00±4.52、155.33±6.51）与同组0 h（100.00±0.00、100.00±0.00）比较,差异有统计学意义（P均＜ 0.05）,且24、36、48 h α3nAChR沉默组明显高于对照组（t=9.26、7.63、5.72,P均＜0.05）.随着染氟时间延长,α3nAChR沉默组和对照组磷酸化JNK表达逐渐升高,其中12、24、36、48 h α3nAChR沉默组（154.00±6.25、149.00±5.57、156.00±6.08、141.67±2.52）和8、12、24、36、48 h对照组（133.33±10.69、173.00±4.00、175.00±11.79、200.67±11.93、200.33±18.58）与同组0 h（100
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