作者:张树威; 陈安民; 李明辉; 祁军; 宋登新; ...骨骺强力霉素基因表达调控甲状旁腺相关蛋白
摘要:目的建立pTet—on骨骺干细胞株,克隆甲状旁腺相关蛋白[PTHrP(1—36)]基因并构建反应质粒pTRE—PTHrP(1—36)。方法用脂质体介导的基因转染技术将pTet—on质粒转染于永生化骨骺干细胞,G418筛选得到稳定克隆,再瞬时转染pTRE-2Hyg—Luc质粒并筛选出高水平诱导、低背景表达的永生化骨骺干细胞系。以RT—PCR方法获得带有酶切位点PTHrP(1—36)基因片段,与载体pTRE-2Hyg均双酶切后连接,转化扩增后对重组质粒进行提取和酶切、测序鉴定。结果筛选到1株诱导后荧光素酶的表达活性增加50倍的骨骺干细胞系;经酶切图谱分析和DNA序列测定证实目的基因已经插入重组质粒。结论筛选得到的永生化骨骺干细胞株受强力霉素诱导后能够低背景、高水平表达;成功克隆PTHrP(1—36)基因并构建了反应质粒pTRE—PTHrP(1—36),为进一步精确调控PTHrP(1—36)基因的表达奠定了基础。
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