作者：黄卫东; 费舟; 章翔; 王西玲; 梁景文代谢型谷氨酸受体机械性损伤表达及脑皮层神经元receptor选择性拮抗剂体外培养免疫组化染色对照组微量移液器乳酸脱氢酶显微镜检测神经元突起神经元数量脑保护作用
摘要：目的研究体外培养小鼠脑皮层神经元机械性损伤后代谢型谷氨酸受体1a(metatropic glutamate receptor 1a,mGluR1a)的表达规律及其选择性拮抗剂1-氨基茚-1,5-二羧酸(1-aminoindan-1,5-dicarboxylic acid,AIDA)的保护作用. 方法孕15～16 d昆明种小鼠胚胎脑皮层神经元体外培养7 d,以微量移液器塑料滴头在培养孔内划割,造成机械性损伤,伤后不同时间点(10,30 min、1,3,6,12,24,72 h)行神经元免疫组化染色,并留取培养液上清,检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性;对照组除不划伤神经元,其他处理同损伤组.AIDA处理组在损伤前30 min,每孔加入AIDA使其终浓度为20 μmol/L,其余步骤同前,激光扫描共聚焦显微镜检测AIDA处理前后神经元细胞内Ca2+含量变化. 结果 mGluR1a在正常神经元中表达呈弱阳性,染色颗粒分布于胞浆、胞膜及突起;机械性损伤后10 min起,mGluR1a表达明显增强,胞核周围胞浆内染色明显加深,持续至伤后24 h,神经元突起中也有明显表达,伤后72 h,存活神经元数量明显减少,mGluR1a染色呈弱阳性.对照组LDH活性为(80.5±21.9)U/L,损伤后30 min, LDH活性较对照组明显增加(P﹤0.05),3,6 h时与对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05),伤后12～72 h, LDH活性较对照组明显增强(P﹤0.05).伤后12～72 h,AIDA处理组LDH活性较单纯损伤组明显降低(P﹤0.05).AIDA处理组较对照组神经元细胞内Ca2+含量明显降低(P﹤0.05). 结论体外培养小鼠脑皮层神经元机械性损伤后mGluR1a表达明显增强,其选择性拮抗剂AIDA的脑保护作用显著.
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