作者：李亚男 方峰 甄宏 周玉峰 董永绥巨细胞病毒感染t淋巴细胞转录因子
摘要：目的研究小鼠巨细胞病毒（MCMV）感染对共培养体系中调节性T细胞（Treg）的诱导作用和Treg在抗病毒免疫中的调节作用。方法建立小鼠T淋巴细胞与感染CMV的同系小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）体外共培养的细胞模型。蚀斑法检测共培养上清液中MCMV负荷量；细胞计数法分析体系中T淋巴细胞的扩增；流式细胞术检测共培养体系中CD4^＋CD25^＋Treg细胞比例，Western印迹法检测T淋巴细胞中Foxp3蛋白表达强度；RT—PCR法检测MEF中转化生长因子（TGF）-βmRNA表达水平；双抗体夹心ELISA法检测细胞培养上清液中TGF—β蛋白表达水平。组间差异采用单因素方差分析。结果T淋巴细胞与MCMV感染的MEF共培养1d和3d后，培养上清液中病毒负荷量较对照组显著减少；但是共培养6d后，T淋巴细胞的免疫保护作用消失，病毒量为（5．58±0．67）×10^3PFU/mL，与感染对照组的（6．05±0．34）×10^5PFU／mL比较，差异无统计学意义。CMV感染3d后，T淋巴细胞数由感染前的（2．02±0．05）×10^6／mL增至（2．25±0．13）×10^6／mL（P〈0．05）；但继续培养至6d时，T淋巴细胞数为（2．08±0．14）×10^6／mL，与3d时比较，差异无统计学意义。CD4^-CD25^-Foxp3^＋Treg细胞比例和Foxp3蛋白表达变化相似，均随MCMV感染时间延长而增加，在感染后6d分别增至对照组的2倍和3倍；TGF-β在MEF中的基因转录水平（A值）由感染前的1．09±0．13增至感染3d后的3．15±0．54，共培养上清液中的蛋白表达强度在感染后3d增至（3．85±0．32）μg／L，与感染前的（1．74±0．14）μg／L比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论随感染时间延长，MCMV可能通过促进TGF-β表达等多种途径诱导Treg增殖活化。
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