作者：白雪帆; 张颖; 李光玉; 王平忠; 孙永涛; ...辅受体配体细胞内双表达病毒感染阻断作用基因疗法
摘要：目的观察Ⅰ型人免疫缺陷病毒(HIV-1)辅受体的配体--RANTES和SDF-1α双表达于人淋巴细胞对各种嗜性HIV-1毒株感染的阻断作用.方法用pLNCX-R-K-S-K重组逆转录病毒液感染原代人外周血淋巴细胞(PBLs),抗神经生长因子受体(NGFR)-免疫磁珠法分离转化成功的PBLs,流式细胞仪检测筛选效率;HIV-1 M嗜性、T嗜性和双嗜性毒株攻击转化PBLs,检测HIV-1逆转录酶活性和p24抗原分泌,以观察抗HIV-1感染的作用;同时进行转化PBLs表面CD3、CD4、CCR2、CCR5和CXCR4表达及破伤风毒素刺激后3H-胸苷(thymidine)掺入量检测,观察HIV-1辅受体配体的双表达对人PBLs正常生物学功能的影响.结果抗-NGFR-免疫磁珠法获得了转化成功的PBLs,流式细胞仪检测发现pLNCX-R-K-S-K转染组92%以上的PBLs鼠抗NGFR标记物为阳性;HIV-1 M嗜性、T嗜性和双嗜性毒株攻击后,pLNCX-R-K-S-K转化PBLs可以见到明显的逆转录酶活性和p24抗原分泌抑制,并且在感染后第12～20天时抑制作用最强;pLNCX-R-K-S-K转化PBLs表面CD3、CD4和CCR2表达水平无明显变化,而CCR5和CXCR4表达水平降低;破伤风毒素刺激后的转化PBLs仍具有主动增殖的能力.结论HIV-1辅受体的配体通过在人PBLs内双表达,使HIV-1两类主要辅受体表型剔除,基本阻断了HIV-1的感染,并且对PBLs的正常生物学功能没有明显影响.
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