作者：张申英; 张欣欣; 金根娣; 仇德琪; 陆志檬表达纯化c型肝炎样病毒属免疫球蛋白可变区重组融合蛋白质类临床应用
摘要：目的克隆并表达中国不同地区不同基因型的丙型肝炎病毒高变区1(HCV HVR1)蛋白,并用表达纯化产物检测慢性丙型肝炎患者血清中的相应抗体,分析其临床意义.方法根据31株HCV HVR1序列分析及免疫原性预测结果,选择4株克隆(1b型3株,2a型1株),从pGEMT-E2克隆中扩增得到4个HVR1片段,将其分别克隆到原核表达载体pQE40中,表达产物经纯化后用以检测慢性丙型肝炎患者血清中的HVR1抗体.结果构建的HVR1原核表达载体在大肠埃希菌中成功表达了4种相对分子质量约为28 000的二氢叶酸还原酶(DHFR)-HVR1融合蛋白,纯化蛋白的获得率约为320～800 μg/100ml培养液.这4种融合蛋白(SH1b、BJ1b、SD1b、SD2a)与慢性丙型肝炎患者的血清结合率分别为72.8%(51/70)、60%(42/70)、48.6%(34/70)和58.6%(41/70).在20例用干扰素治疗的丙型肝炎患者中,57%(4/7)的干扰素治疗无应答者治疗前血清能与之反应,而应答者血清中只有15.3%(2/13)能与之反应.干扰素治疗应答者血清与4种融合蛋白反应的A值高于治疗无应答者(P＜0.05).结论选择的4株HCV HVR1片段在大肠埃希菌中获得成功表达,所得4种HVR1融合蛋白能与HCV感染者血清发生较广泛的反应.
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