作者：华瑞; 牛俊奇; 王峰丙型肝炎病毒特异性锤头样核酶体外转录切割活性
摘要：目的研究针对丙型肝炎病毒(HCV)特异性锤头样核酶(Rz)的体外转录及切割活性.方法设计3种锤头样核酶:Rz1、RZ2分别作用于HCV RNA 5'-非编码区(5'-NCR)上核酸序列136～160、313～337,Rz3作用于核心(C)区上核酸序列373～388.为区别于反义核酸的封闭作用,设计在RZ3的催化环上存在点变异(G取代A)的变异核酶Rzm用作对照.体外转录出靶HCV RNA和核酶RNA,在一定条件下,将32P标记的靶HCV RNA与核酶RNA按不同浓度比例进行切割反应,电泳后放射自显影,通过同位素扫描成像分析仪分析来评价核酶切割效率.结果除Rzm外,在生理温度下,3种核酶均有活性,并随核酶浓度增加而提高;核酶切割靶位点距HCV起始密码子近切割效率高.结论设计并观察到体外具有HCV特异性切割活性的锤头样核酶,为进行核酶的细胞内应用研究奠定基础.
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