作者：叶绿; 张红英; 杨光华; 步宏; 郭华smad信号横纹肌肉瘤细胞逆转录一聚合酶链反应westernsmad4表达四甲基偶氮唑盐rd细胞rna干扰阳离子脂质体rnai技术荧光化学信号转导细胞生长诱导凋亡肉瘤细胞系
摘要：目的研究TGF-β/Smad信号对人胚胎性横纹肌肉瘤细胞系RD生长和凋亡的调控作用.方法采用小分子RNA干扰(RNAi)技术,以阳离子脂质体为载体,将生物合成的发夹状短链RNA(shRNA)转染RD细胞,封闭Smad4的表达以阻碍内源性TGF-β/Smad信号的转导;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检验shRNA干扰Smad4表达的效果;采用免疫荧光化学,通过激光共聚焦显微镜检测Smad4封闭前后RD细胞中Smad2/3表达位置的变化;应用四甲基偶氮唑盐(MTT)和3H-thymidine摄入实验检测阻碍内源性TGF-β/Smad信号转导和以外源性TGF-β1刺激这2种条件下RD细胞的生长状况;采用流式细胞术和荧光化学染色检测上述2种条件下RD细胞的凋亡情况.结果 RNAi技术可有效封闭RD细胞中Smad4 mRNA和蛋白的表达;Smad4的封闭导致Smad2/3由胞质入核明显减少;内源性TGF-β/Smad信号转导受阻不但抑制RD细胞生长,并且诱导凋亡;外源性、较高浓度的TGF-β1可抑制RD细胞生长,但不诱导凋亡.结论 TGF-β/Smad信号在一定的浓度范围内精细调控RD细胞的生长和凋亡.
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