作者：宁钧宇; 由江峰; 裴斐; 王洁良; 崔湘霖; ...g3bp单克隆抗体制备方法肿瘤组织基因表达免疫应答
摘要：目的为了研究G3BP(Ras-GAP SH3-binding protein)的功能及作用机制,采用原核表达G3BP蛋白诱导免疫,制备抗G3BP单克隆抗体,并检测G3BP在临床常见肿瘤中的表达情况.方法采用原核表达载体pGEX-5X1,通过IPTG诱导,使用大肠杆菌BL21,高质量表达GST-G3BP融合蛋白.将纯化后的原核表达蛋白注射BALB/c小鼠诱导产生免疫应答,采用经典杂交瘤技术制备单克隆抗体,并应用酶联免疫吸附试验(ELISA)、蛋白免疫印迹和免疫组织化学染色ABC法进行抗体鉴定和肿瘤检测.结果筛选出分泌抗G3BP抗体的单克隆杂交瘤细胞,免疫球蛋白亚类鉴定为IgG1,蛋白免疫印迹及抗原竞争抑制实验表明该抗体是特异性抗G3BP抗体.石蜡切片免疫组织化学法检测临床标本,在肺癌、结肠癌、胃癌、乳腺癌等临床肿瘤活检标本中检出G3BP表达明显增高.在乳腺癌临床组织标本中,G3BP表达水平与c-erbB2表达正相关,与淋巴结转移正相关. 结论成功制备了抗人G3BP单克隆抗体,所得到的特异性G3BP单克隆抗体能够应用于ELISA、Western蛋白免疫印迹以及免疫组织化学染色对不同样本的G3BP表达水平进行检测.G3BP在肺癌、结肠癌、胃癌、乳腺癌等肿瘤中表达明显增高.G3BP有可能作为肿瘤标志物辅助对乳腺癌预后的判断.
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